植物保护论文_怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白
2022/04/11文章目录
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
1.2.1 总RNA提取和cDNA第1链合成
1.2.2 烟草病毒增殖蛋白3基因的克隆
1.2.3 烟草病毒增殖蛋白3基因的生物信息学分析
1.2.4 载体构建
1.2.5 烟草叶片亚细胞定位
1.2.6 烟草病毒增殖蛋白3转基因株系PCR检测
1.2.7 烟草病毒增殖蛋白3转基因株系和非转基因株系移栽苗的病毒接种和光合指标检测
1.2.8 烟草病毒增殖蛋白3基因的组织表达分析
2 结果与分析
2.1 怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3基因cDNA序列
2.2 怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3氨基酸序列
2.3 怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3亲疏水性
2.4 怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3二级结构
2.5 怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3三级结构
2.6 怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3亚细胞定位预测
2.7 怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3系统进化分析
2.8 怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3同源蛋白的序列比对信息
2.9 怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3基因目的片段扩增与瞬时表达载体构建
2.10 怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3亚细胞定位分析
2.11 怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3转基因烟草鉴定、GUS组织化学染色和光合特征
2.12 怀玉山三叶青2个栽培种不同器官中烟草病毒增殖蛋白3基因的表达分析
3 结论与讨论
文章摘要:通过怀玉山三叶青试管苗转录组数据库筛选到怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3基因的核心片段，利用RT-PCR技术克隆该病毒增殖蛋白3基因，并进行序列分析、亚细胞定位、器官表达分析和功能分析。结果表明：怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3基因cDNA总长度为873 bp, G+C含量为44.22%;怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3由290个氨基酸组成，分子量33 374.79 u,等电点9.72,为疏水性蛋白；二级结构由α-螺旋（57.24%）、β-片层（10.69%）、无规则卷曲（32.07%）构成；三级结构为单体；预测怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3主要存在质膜、液泡膜、内质网中；怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3与葡萄烟草病毒增殖蛋白3 （GenBank:XP＿002275179.1、GenBank:XP＿034684444.1）的同源性最高，同源性达到94.83%。通过烟草叶片亚细胞定位分析表明，烟草病毒增殖蛋白3定位于细胞质（可能包括细胞膜）和细胞核膜中。实时定量PCR结果显示，烟草病毒增殖蛋白3基因在怀玉山三叶青2个栽培种中的表达存在器官特异性，怀玉2号和怀玉1号均在叶中表达量最高；烟草病毒增殖蛋白3转基因阳性烟草的三叶青花叶病毒表达量显著高于烟草病毒增殖蛋白3转基因阴性烟草；与烟草病毒增殖蛋白3转基因阴性烟草相比较，烟草病毒增殖蛋白3转基因阳性烟草的净光合速率（Pn）、气孔导度（Gs）、蒸腾速率（Tr）、最大光化学效率（Fv/Fm）、实际光化学量子效率（ΦPSⅡ）、光化学淬灭系数（qP）及电子传递效率（ETR）显著下降，而非光化学淬灭系数（NPQ）显著上升。怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3具有典型烟草病毒增殖蛋白3的结构特征，氨基酸序列及核酸序列与同源物种相似度高，进化上高度保守，且可促进三叶青烟草花叶病毒的增殖，降低植株的光合作用效率。
文章关键词:
论文DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2022.06.005
论文分类号:S435.67
